高效液相色谱仪示差折光检测器测定甘蔗中三种水溶性糖含量
2020-02-07 09:54:37来源：admin
甘蔗是我国最重要的糖料作物，它不仅是食糖业的重要原料，而且是能源、化工、酿酒和饲料的原料。甘蔗节间含有大量的糖分，主要有葡萄糖、果糖和蔗糖这三种糖类碳水化合物。无论是感官还是研究表明，甘蔗在不同生长时期、不同节间糖分含量存在较大差异。因此分析测定甘蔗不同时期、不同节间糖含量，分析多种糖分生长积累的规律，进而运用统计分析的方法了解蔗糖分积累与糖代谢相关酶活性变化之间的关系，从生长机理各个方面探讨研究甘蔗生长过程和糖分积累的规律，并为甘蔗高产高糖栽培及遗传改良等提供理论上的依据。
糖含量的测定方法有化学比色法、旋光法、气相色谱法和液相色谱法。一般化学法只能测定各种糖的总量而不能分别测定各种糖的含量，并且有研究表明，测得的葡萄糖、果糖值比实际值略高而存在偏差，极有可能影响甘蔗品质的判断。气相色谱法虽可分别测定不同糖的含量，灵敏度高，但是由于糖类化合物沸点高，难以汽化，必须进行衍生化反应才可检测，样品处理、分析检测步骤较为繁琐，且认为干扰误差较大。
谱析色谱实验室，采用本公司生产的LC-3000高效液相色谱仪分析检测蜂蜜、菠萝、马铃薯等中不同糖类碳水化合物含量，已在实际应用中取得良好的分析效果，得到客户的肯定。目前，甘蔗节间糖类碳水化合物含量测定目前报道主要采用一般的化学方法。谱析仪器公司充分吸收国内外相关研究方案，对分析条件进一步优化，采用碳水化合物分析专用色谱柱对甘蔗节间糖分进行分离分析，建立一种简便、快速和准确可靠的，能同时测定果糖、葡萄糖、蔗糖含量的高效液相色谱仪分离法。
1.仪器与试剂
高效液相色谱仪LC-3000（山东谱析），示差折光检测器，针孔进样器。葡萄糖、果糖、蔗糖标样为国产色谱纯(纯度均不低于99.5%)，乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。
2.色谱分析条件
色谱柱：Agilent Zorbax carbohydrate柱(4.6mm×250mm，5.0μm)；流动相为乙腈-水(75:25，V/V)；柱温30℃；检测池温度35℃；流速1.0mL/min，进样量20μL。
3.糖标准溶液的配制
准确称取果糖、葡萄糖、蔗糖各2.0g(精确到0.0001g)，转移至100mL容量瓶中，用高纯水定容至刻度，得到各自质量浓度均为20mg/mL的混标溶液。逐级稀释至10、5、2.5、1.25、0.625mg/mL。上机进样分析前经0.45μm微孔滤膜过滤。每个样品重复3次。
4.样品处理
将冷冻的节间样品去皮，切碎，在液氮中磨成粉末状，精确称取样品粉末1.00g(精确到0.0001g)，加入80%的乙醇5mL，80℃恒温水浴30min后，12000r/min离心20min，取上清液，残渣加入5mL 80%的乙醇溶液重复提取1次，合并提取上清液，90℃水浴中蒸干乙醇，加入高纯水定容至5mL，混匀后用一次性注射器抽取提取样液，经0.45μm微孔滤膜过滤后以备上机进样分析。每个样品重复3次。
谱析分析结果表明，采用高效液相色谱仪分析甘蔗节间果糖、葡萄糖、蔗糖，保留时间重现性好，三者的含量和峰面积比值之间呈良好的线性关系，相对标准偏差较好，加标回收率准确度较高，是一种检测分析甘蔗节间糖分组成和含量的简便、快速、准确的方法。如有相关分析需求请与山东谱析科学仪器有限公司0632-5571618联系，亦可登录公司网站在线即时了解咨询。
