谱析仪器:解读反相液相色谱的左膀右臂

2018-12-29 13:21:50来源:admin

     在液相色谱仪分析方法开发时选择合适的有机溶剂需要考虑几大关键因素(见最后的表格)。其中,黏度是重要因素之一,因为高黏度溶剂会产生高背压,因而可能会对仪器系统带来限制。

  其它重要的溶剂特征还包括UV截止波长和极性指数:UV截止波长较高会导致UV/Vis检测的灵敏度不佳,而溶剂的极性指数较低则往往会导致化合物洗脱较快,因而通常用于色谱柱的清洗。

  优选溶剂:

  乙腈、甲醇、丙酮

  乙腈 毫无疑问是优选的有机溶剂,因为其在与水的混合体系中产生的系统背压极低,而且UV截止波长也很低,因此UV/Vis检测的灵敏度更高。

  甲醇 是另一种常用的有机溶剂,它的洗脱强度与乙腈相当,UV吸收相对其他溶剂也较低,而且价格比乙腈便宜得多。甲醇的主要缺点是粘度较大带来的高背压,尤其是在使用小粒径的HPLC色谱柱时更为明显。

  虽然丙酮 的UV吸收较高,但如果分析物在较高的UV波长进行检测,或者使用其它类型检测器,如质谱或ELSD,则丙酮也可以进行有效的使用。

  次选溶剂:

  乙醇、异丙醇/正丙醇、四氢呋喃

  一般不建议使用乙醇,因为其在与水的混合体系中产生很高的背压。但是有时乙醇对于针对成品的制备方法来说是优先选择,因为它可以避免溶剂残留。

  异丙醇和正丙醇 的洗脱强度较高,也是色谱柱进行低流速清洗最常用的溶剂,但是它们同样会产生较高的背压。另外,它们是很好的助溶剂,在分析完整蛋白时经常被使用。

  四氢呋喃 的洗脱强度与正丙醇相当,但由于较昂贵所以不太常用。但是,它可以作为脂肪或高色素样品的清洗或再生溶剂。


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