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高效液相色谱仪的操作注意事项

作者:山东谱析 来源:www.sdpxyq.com 发布日期:2019-09-13

      高效液相色谱仪由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统等五大部分组成(图1)。分析前,选择适当的色谱柱和流动相,开泵,冲洗柱子,待柱子达到平衡而且基线平直后,用微量注射器把样品注入进样口,流动相把试样带入色谱柱进行分离,分离后的组分依次流入检测器的流通池,最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时,检测器把组分浓度转变成电信号,经过放大,用记录器记录下来就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。但操作液相色谱仪时谨记以下注意事项。

1、排气泡

  如何排出聚四氟乙烯管道内气泡:

  排空操作:打开LC-20AT泵排空阀(逆时针90度以上),按Purge键,泵开始排

  空运行。检查流动相入口聚四氟乙烯管路没有气泡后,Purge灯不再闪烁时,关闭LC-20AT泵排空阀。

  如何排出进样针内气泡:

  使用手动进样器进样时,在进样前和进样后都需用多次清洗进样针筒,洗针液一般选择与样品液一致的溶剂,进样前必须用样品液润洗进样针筒3遍以上,并排除针筒中的气泡(进样针吸取样品之后,颠倒针管,气泡会往上跑,猛推一些样品出去,气泡即可随之排出)。

2、流动相:

  流动相应选用色谱纯试剂、高纯水,酸碱液及缓冲液需经 0.22μm 膜过滤后使用,过滤时注意区分水系膜和有机相膜的使用范围; 使用泵时,A、B 两相中,则 A管道连接蓝盖瓶的水相,B 管道连接蓝盖瓶的有机相。确保每天用重新超声和超滤过的水和有机相。

3、色谱柱:

  使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书,注意适用范围,如 pH 值、流动相类型等;

  使用符合要求的流动相;

  使用保护柱;

  如所用流动相为含盐流动相,反相色谱柱使用后,先用水或低浓度甲醇水(如5%甲醇水溶液),再用甲醇冲洗。

  色谱柱在不使用时,根据柱子特性和使用要求,用不同溶剂封存。比如,PAH专用柱用乙腈冲洗封柱,取下后紧密封闭两端保存;不要高压冲洗柱子;一般用流速 1.0ml/min 冲洗,压力约 7Mpa。

4、样品:

  进样之前必须用 0.22μm 滤膜过滤,确保样品中不含固体颗粒;

  一般尽量用流动相制备样品液。比如测 PAHs 时,流动相用的是水和已腈,进样的溶剂也应为水或已腈。

  手动进样时,进样量一般大于 40μl,并且不要含气泡,针头外壁要擦净。

5、压力

  操作过程若发现压力很小,(一般是在 6-20)则可能管件连接有漏,注意检查。当出现错误警告(各组件指示灯均为红色),一般为漏液,其中一个感应器中已有溶剂,漏液故障排除后,擦干,点击On line操作界面中的Instrument/System Off,然后再点击操作界面中的 Instrument/System On 即可。

  操作过程若发现压力非常高,则可能管路已堵,应先卸下色谱柱,然后用分段排除法检查,确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞,可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗,还可采用小流量反冲的办法(新柱不提倡),若还是无法通畅,则需换柱;运行过程中自动停泵,可能为压力超过上限或流动相用完;

6、切记关灯

  超过2小时以上不做实验时,从工作站将检测器灯关掉(灯的寿命有限)。

7、使用登记:

  使用者须认真履行液相色谱仪使用登记制度,出现问题及时报告,不要擅自拆卸仪器。

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