高效液相色谱仪的操作注意事项

      高效液相色谱仪由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统等五大部分组成（图1）。分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电信号，经过放大，用记录器记录下来就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。但操作液相色谱仪时谨记以下注意事项。

1、排气泡

　　如何排出聚四氟乙烯管道内气泡：

　　排空操作：打开LC-20AT泵排空阀（逆时针90度以上），按Purge键，泵开始排

　　空运行。检查流动相入口聚四氟乙烯管路没有气泡后，Purge灯不再闪烁时，关闭LC-20AT泵排空阀。

　　如何排出进样针内气泡：

　　使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用多次清洗进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液润洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡（进样针吸取样品之后，颠倒针管，气泡会往上跑，猛推一些样品出去，气泡即可随之排出）。

2、流动相：

　　流动相应选用色谱纯试剂、高纯水，酸碱液及缓冲液需经 0.22μm 膜过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和有机相膜的使用范围； 使用泵时，A、B 两相中，则 A管道连接蓝盖瓶的水相，B 管道连接蓝盖瓶的有机相。确保每天用重新超声和超滤过的水和有机相。

3、色谱柱：

　　使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如 pH 值、流动相类型等；

　　使用符合要求的流动相；

　　使用保护柱；

　　如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5%甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。

　　色谱柱在不使用时，根据柱子特性和使用要求，用不同溶剂封存。比如，PAH专用柱用乙腈冲洗封柱，取下后紧密封闭两端保存；不要高压冲洗柱子；一般用流速 1.0ml/min 冲洗，压力约 7Mpa。

4、样品：

　　进样之前必须用 0.22μm 滤膜过滤，确保样品中不含固体颗粒；

　　一般尽量用流动相制备样品液。比如测 PAHs 时，流动相用的是水和已腈，进样的溶剂也应为水或已腈。

　　手动进样时，进样量一般大于 40μl，并且不要含气泡，针头外壁要擦净。

5、压力

　　操作过程若发现压力很小，（一般是在 6-20）则可能管件连接有漏，注意检查。当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的 Instrument/System On 即可。

　　操作过程若发现压力非常高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段排除法检查，确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞，可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗，还可采用小流量反冲的办法（新柱不提倡），若还是无法通畅，则需换柱；运行过程中自动停泵，可能为压力超过上限或流动相用完；

6、切记关灯

　　超过2小时以上不做实验时，从工作站将检测器灯关掉（灯的寿命有限）。

7、使用登记：

　　使用者须认真履行液相色谱仪使用登记制度，出现问题及时报告，不要擅自拆卸仪器。